植物蔗糖含量檢測(cè)試劑盒說明書
微量法
貨號(hào)：BC2465
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
試劑一：臨用前加1mL蒸餾水溶解，用水稀釋10倍，備用，即1mg/mL。
產(chǎn)品說明：
蔗糖是植物光合作用的主要產(chǎn)物，也是糖分運(yùn)輸和儲(chǔ)藏的主要形式。因此，測(cè)定蔗糖含量對(duì)于植物糖代謝具有重要意義。此外，蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。先用堿與樣本共熱，破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖進(jìn)一步與間*二酚反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，在480nm 下有特征吸收峰。
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.0316 mg/mL
線性范圍：0.039-12 mg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱取0.1g 樣本，常溫研碎，加入0.5mL 提取液，適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到離心管中，置于80℃水浴鍋中10min，振蕩3~5 次，冷卻后，4000g，25℃離心10min，取上清，加入2mg試劑五，80℃脫色30min，再加入0.5mL 提取液，4000g，25℃離心10min，取上清液測(cè)定。
二、測(cè)定步驟

1. 可見分光光度/酶標(biāo)儀計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至480nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測(cè)定（在1.5mL EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，沸水浴10min左右，冷卻后取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中測(cè)定480nm 處的吸光值，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管分別記為A1、A2 和A3。
三、蔗糖含量計(jì)算
1、按照樣本蛋白濃度計(jì)算
蔗糖含量（mg/mg prot）= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測(cè)定蛋白濃度。
2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
蔗糖含量(mg/g 質(zhì)量）=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
    C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
當(dāng)樣本吸光值大于1.4時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測(cè)定。
參考文獻(xiàn)：
[1] Fils-Lycaon B, Julianus P, Chillet M, et al. Acid invertase as a serious candidate to control the balance sucrose versus (glucose+ fructose) of banana fruit during ripening[J]. Scientia horticulturae, 2011, 129(2): 197-206.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0580/BC0585 蔗糖合成酶（SS）活性檢測(cè)試劑盒
BC0600/BC0605 蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性檢測(cè)試劑盒

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