儲存條件
-20℃
中文名稱
肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒其他系列
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Cinnamyl Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase(CAD) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑，詳情見網(wǎng)站說明書

產(chǎn)品型號：BC4170-50T/48S

更新時間：2024-04-12

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：962

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

肉桂醇脫氫酶（CAD）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC4170
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑二	液體×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體50 mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

提取液：內(nèi)含不溶物，使用前搖勻。
試劑一：臨用前加入15 mL試劑三溶解。可溶解后分裝-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
試劑二：液體置于試劑瓶內(nèi)玻璃管中。臨用前加入15 mL乙醇充分混勻，配好后2-8℃保存。
工作液的配制：將試劑一、試劑二、試劑三按1:1:2（V:V:V）的比例配制工作液，工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
CAD 是木質(zhì)素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶之一，催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成與之相應(yīng)的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP⁺，在340nm下測定NADPH消耗速率，即可反映CAD活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰、乙醇和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測。
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟

紫外分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
操作表：在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑：

試劑名稱	空白管	測定管
樣本（µL）	-	100
蒸餾水（µL）	100	-
工作液（µL）	900	900
在1mL石英比色皿中分別加入上述試劑，充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1，迅速置于25℃水浴5min，拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2，計算ΔA測定管= A1測定-A2測定，ΔA空白管=A1空白-A2空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。

三、CAD酶活計算

按蛋白濃度計算

酶活定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=321.54×ΔA÷Cpr

按樣本質(zhì)量計算

酶活定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=321.54×ΔA÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義：每10⁴個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.643×ΔA
ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.001L；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，5min；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬；10⁹：單位換算系數(shù)，1mol=10⁹nmol。
注意事項：
1、當(dāng)A1小于0.8，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定。
2、空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.04。
實驗實例：

取約0.1g三葉草葉，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清，按照測定步驟操作，測定計算ΔA測定管= A1測定-A2測定=1.532-1.462=0.07，ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.012-1.007=0.005，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.07-0.005=0.065，按樣本質(zhì)量計算得：CAD酶活（U/g 質(zhì)量）=321.54×ΔA÷W=209.001 U/g 質(zhì)量。