儲存條件
-20℃
中文名稱
4-香豆酸：輔*A連接酶活性檢測試劑盒其它
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
4-Coumarate CoA Ligase(4CL) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC4220-50T/48S

更新時間：2024-04-15

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：869

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

產(chǎn)品介紹

4-香豆酸：輔*A連接酶（4CL）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號: BC4220
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑三	液體6 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑五	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

提取液：內(nèi)含不溶物，使用前搖勻；
試劑二：臨用前加入6 mL蒸餾水溶解，可以分裝后-20℃保存，避免反復凍融；
試劑四：臨用前用6 mL蒸餾水溶解備用，可以分裝后-20℃保存，避免反復凍融；
試劑五：加入1 mL乙醇溶解，臨用前用蒸餾水稀釋40倍后備用，現(xiàn)用現(xiàn)配；
工作液的配制：按體積比將試劑二：試劑三：試劑四：試劑五=1:1:1:1的比例配制工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
4-香豆酸：輔*A連接酶（4-coumarate:CoA ligase，4CL）是木質(zhì)素生物合成的關鍵酶之一，主要催化肉桂酸及其羥基或者甲氧基衍生物生成相應的輔*A酯，這些中間產(chǎn)物隨后進入苯丙類衍生物支路合成途徑。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中，研究該酶可以探討多種生物細胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機理，為減少水果石細胞含量而提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA，其在333nm下測有特征吸收峰，測定4-香豆酸CoA的生成速率，即可反映4CL活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。
操作步驟：

樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟

紫外分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至333nm，蒸餾水調(diào)零。
操作表（在1.5mLEP管中進行下列操作）：

	測定管	空白管
樣本（µL）	100	-
蒸餾水（µL）	-	100
工作液（µL）	400	400
試劑一（µL）	500	500
充分混勻后測定333nm下的10s初始值A1，37℃反應1h后再次測定1h 10s吸光值A2，計算ΔA測定管=A2測定管-A1測定管，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白

三、4CL活性計算

按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每mg組織蛋白每小時生成1nmol 4-香豆酸輔*A定義為一個酶活力單位。
4CL（U/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣×Cpr) ÷T=476.19×ΔA÷Cpr

按樣本質(zhì)量計算：

單位定義：每g組織每小時生成1nmol 4-香豆酸輔*A定義為一個酶活力單位。
4CL（U/g 質(zhì)量）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=476.19×ΔA÷W

按細菌或細胞數(shù)量計算：

單位定義：每1萬個細菌或細胞每小時生成1nmol 4-香豆酸輔*A定義為一個酶活力單位。
4CL（U/10⁴ cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.9124×ΔA
V反總：反應體系總體積，1×10^-3L；ε：4-香豆酸輔*摩爾消光系數(shù)，2.1×10⁴L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，1h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬；10⁹：單位換算系數(shù)，1mol=10⁹nmol。
注意事項：

若ΔA大于0.5，將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定。
建議一次測定不要測定過多樣本以免耽誤過多的酶促反應時間。
空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.01。

實驗實例：

取0.1g芥菜加1mL提取液進行樣本處理，取上清后按照測定步驟操作，測得ΔA測定管=A2測定管-A1測定管=0.784-0.655=0.129，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.129，按樣本質(zhì)量計算酶活得：4CL（U/g 質(zhì)量）=476.19×ΔA÷W=476.19×0.129÷0.1=614.29 U/g 質(zhì)量。