D-木糖含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

微量法

貨號(hào)：BC4395

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一的配制：臨用前取一瓶試劑一A加入10mL試劑一B，溶解后備用，2-8℃保存1周，若試劑變黃色則已經(jīng)變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg木糖。臨用前加入1 mL蒸餾水配制成10mg/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，2-8℃保存4周。

產(chǎn)品說(shuō)明：

木糖是一種戊糖。天然D-木糖是以多糖的形態(tài)存在于植物中。木糖可以活化人體腸道內(nèi)的雙岐桿菌并促其生長(zhǎng)，雙歧桿菌是益菌，該菌越多越有益人體健康，食用木糖能改善人體的微生物環(huán)境，提高機(jī)體的免疫能力；同時(shí)木糖在小腸上段吸收后不參與體內(nèi)的代謝，經(jīng)腎臟排出。因此，D-木糖的吸收一直作為小腸吸收不良的重要功能指標(biāo)。

D-木糖在強(qiáng)酸條件下水解產(chǎn)生糠醛，糠醛可與間苯*反應(yīng)生成粉紅色化合物，在554 nm處有特殊吸收峰，據(jù)此可由吸光值計(jì)算出樣本中木糖的含量。

技術(shù)指標(biāo)：

低檢出限：0.0007 mg/mL

線性范圍：0.0078-0.9 mg/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、鼓風(fēng)烘箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、30-50目篩、EP管、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、植物樣本：將供試的植物樣本在65℃的鼓風(fēng)烘箱中烘干，研磨成粉狀，過(guò)30-50目篩。按質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）1 : 50~100比例（建議稱取10mg烘干樣本，加入0.5 mL提取液），渦旋混勻，在100℃水浴鍋中準(zhǔn)確水解2 h，然后10000 rpm，室溫離心15 min，棄沉淀，取上清液待測(cè)。

2、組織樣本：按質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）1 : 5~10比例（建議稱取0.05g樣本，加入0.5 mL提取液），研磨勻漿后，在100℃水浴鍋中準(zhǔn)確水解2 h，然后于10000 rpm，室溫離心15 min，棄沉淀，取上清液待測(cè)。

3、血清（漿）等液體樣本：直接測(cè)定。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至554 nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至0.8、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：

實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需50µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4、 操作表（在0.6 mL EP管中操作）：

三、D-木糖含量的計(jì)算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，mg/mL）。

2、D-木糖含量的計(jì)算：

（1）植物中木糖含量（mg/g）=x×V提取÷W1=0.5x÷W1

（2）組織中木糖含量（mg/g）=x×V提取÷W2=0.5x÷W2

（3）血清（漿）木糖含量（mg/mL）= x×V樣÷V樣=x

V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V提取：加入提取液的體積，0.5 mL；W1：植物樣本的質(zhì)量，g；W2：組織樣本的質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、 如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

2、 試劑一B因有強(qiáng)烈刺激性氣味，過(guò)多吸入對(duì)人體有害，故建議在通風(fēng)櫥中進(jìn)行操作。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 稱取0.05g衛(wèi)矛莖加入0.5mL提取液進(jìn)行樣本處理，取上清后稀釋2倍按照測(cè)定步驟操作，96孔板測(cè)得并計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管=0.345-0.045=0.3，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.5448x-0.0132，計(jì)算x=0.203，按照公式計(jì)算得：

植物中木糖含量（mg/g）=x×V提取÷W1×2（稀釋倍數(shù)）=0.203×0.5÷0.05×2=4.06 mg/g。

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