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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法土壤系列BC5500-50T/24S土壤碳酸酐酶（S-CA）活性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)：BC5500-50T/24S
更新時(shí)間：2024-04-19
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1126
010-50973130
產(chǎn)品分類
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土壤碳酸酐酶（S-CA）活性檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號(hào)：BC5500
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體75mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前取一支試劑二，先加入1mL丙酮使粉劑充分溶解，再加入10mL蒸餾水。未用完的試劑分裝保存，-20℃可以分裝保存1周，避免反復(fù)凍融。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品：5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前取50μL的5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液于試劑瓶中，加入750μL蒸餾水充分混合，配置成0.3125 μmol/mL的酚標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
碳酸酐酶（Carbonic Anhydrase, CA, EC4.2.1.1）是一種以 Zn2+為活性中心的金屬酶，可用來高效催化 CO2 的可逆水合反應(yīng)：CO2+H20?HCO3-+H+，催化速率可達(dá)自然條件下的107倍，是目前已知催化速率最快的酶之一。
碳酸酐酶可催化乙酸對(duì)硝基苯酯反應(yīng)生成對(duì)硝基苯*，通過檢測(cè)405nm處吸光值上升速率反映碳酸酐酶活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、30-50目篩、研缽、分析天平、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、甲苯、蒸餾水和冰。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干，過 30~50目篩。
二、測(cè)定步驟
1、 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至405nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑一使用前37℃預(yù)熱15min。
3、 標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定
（1） 標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定：在2mL EP管內(nèi)中加入320μL標(biāo)準(zhǔn)液，1180μL試劑一，充分混勻后，于1mL玻璃比色皿中測(cè)定405nm處吸光值，記作A標(biāo)準(zhǔn)。
（2） 標(biāo)準(zhǔn)空白管測(cè)定：在2mL EP管內(nèi)中加入320μL蒸餾水，1180μL試劑一，充分混勻后，于1mL玻璃比色皿中測(cè)定405nm處吸光值，記作A標(biāo)準(zhǔn)空白。
（3） 計(jì)算?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白。（標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)準(zhǔn)空白管只需做1-2次。）
4、 操作表：（在2mLEP管內(nèi)加入）
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 0.2g | 0.2g |
甲苯 | 50 | 50 |
充分振蕩使土壤呈潮濕狀態(tài)，常溫靜置15min | ||
試劑一 | 1130 | 1130 |
- | - | 煮沸10min，冰水冷卻 |
試劑二 | 320 | 320 |
37℃反應(yīng)5min后立即放入冰水浴中，之后15000g，4℃離心10min。吸取上清于1mL玻璃比色皿中測(cè)定405nm處吸光值，記作A測(cè)定，A對(duì)照。計(jì)算?A =A測(cè)定-A對(duì)照。（每個(gè)測(cè)定管對(duì)應(yīng)一個(gè)對(duì)照管） | ||
三、土壤CA活性計(jì)算
按樣本質(zhì)量計(jì)算
單位的定義：37℃，每g土壤每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 對(duì)硝基苯*定義為一個(gè)酶活力單位。
S-CA活性（U/g 質(zhì)量）=C標(biāo)×?A÷?A標(biāo)準(zhǔn)×V標(biāo)準(zhǔn)÷W÷T×F=0.02×?A÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F
C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.3125μmol/mL；V標(biāo)準(zhǔn)：反應(yīng)體系中加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.32mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5min； W：樣本質(zhì)量，g；F：樣本稀釋倍數(shù)。
注意事項(xiàng)：
1、 如果A測(cè)定大于1.5或者?A大于0.8，可以減少樣本量或者縮短37℃酶促反應(yīng)時(shí)間；?A小于0.02，可以加大樣本量或者延長37℃酶促反應(yīng)時(shí)間。注意計(jì)算時(shí)同步修改計(jì)算公式。
2、 如果離心后待測(cè)的上清依然渾濁，可嘗試加大離心轉(zhuǎn)速或延長時(shí)間，例如20000g，4℃離心10min。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、 稱取0.2014g土壤樣本65號(hào)，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算?A =A測(cè)定-A對(duì)照=0.595-0.400=0.195，?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.448-0=0.448，帶入公式計(jì)算：
S-CA活性（U/g 質(zhì)量）=0.02×?A÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =0.043 U/g 質(zhì)量
2、 稱取0.2015g土壤樣本1號(hào)，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算?A =A測(cè)定-A對(duì)照=0.275-0.137=0.138，?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.448-0=0.448，帶入公式計(jì)算：
S-CA活性（U/g 質(zhì)量）=0.02×?A÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =0.031 U/g 質(zhì)量
參考文獻(xiàn)：
[1] Li W, Yu L J, Yuan D X, et al. A study of the activity and ecological significance of carbonic anhydrase from soil and its microbes from different karst ecosystems of Southwest China[J]. Plant and Soil, 2005, 272(1):133-141.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0150/BC0155 土壤纖維素酶（S-CL）活性檢測(cè)試劑盒
BC0160/BC0165 土壤β-葡萄糖苷酶（S-β- GC）活性檢測(cè)試劑盒
土壤碳酸酐酶（S-CA）活性檢測(cè)試劑盒 土壤碳酸酐酶（S-CA）活性檢測(cè)試劑盒
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