抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

產(chǎn)品說(shuō)明：
酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布極廣泛，遍布各種組織，主要存在于細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，所以常作為溶酶體標(biāo)志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和胞質(zhì)內(nèi)。各種動(dòng)物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的適宜 pH 為 4.5～5.5。存在于正常人肺泡巨噬細(xì)胞和白血病人脾臟的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在細(xì)胞濾泡中，并不是釋放入血液。血液中的 TRAP 絕大多數(shù)來(lái)源于破骨細(xì)胞，因此可以通過(guò)測(cè)量血液中的 TRAP 了解破骨細(xì)胞的功能狀態(tài)。

以萘酚 AS-BI 為底物，在酸性 pH 下被酸性磷酸酶水解釋放出磷酸和萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯(lián)生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中，若細(xì)胞內(nèi)的 ACP 有抗酒石酸的活性，則呈陽(yáng)性反應(yīng)。該染色液可用于新鮮血涂片、細(xì)胞涂片，亦可用于冰凍切片、石蠟切片。
自備材料：
1、 蒸餾水、恒溫箱
2、 載玻片、推玻片
3、 光學(xué)顯微鏡
操作步驟(僅供參考)：
(一)血液、細(xì)胞涂片：
1、 推片：取新鮮血液或骨髓涂片置于載坡片上，推玻片于載玻片保持 30 度，置于血液或細(xì)胞滴液的正前方，稍往后移不血液或細(xì)胞滴液接觸使后者沿推片下緣散開(kāi)，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動(dòng)鋪滿(mǎn)血膜為止。
2、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 30s～3min，多數(shù)情況下 30～60s 即可。
3、 水洗，稍微晾干(不易過(guò)分干燥)。
4、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃溫箱，避光浸染 45～60min，水洗。
5、 復(fù)染：蘇木素染色液染色 5min 或甲基綠染色液染色 2～3min。
6、 水洗、晾干、鏡檢。
(二)冰凍切片：
1、 冰凍切片回溫 37℃，水中浸泡 1～2min。
2、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 1～3min。
3、 水洗，稍微晾干(不易過(guò)分干燥)。
4、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃溫箱，避光浸染 45～60min，水洗。
5、 復(fù)染：蘇木素染色液染色 5～8min 或甲基綠染色液染色 2～3min。
6、 水洗、晾干、鏡檢。
(三)石蠟切片：
1、 石蠟切片脫蠟 5～10min，重復(fù)一次。
2、 無(wú)水乙醇 5min，90%乙醇和 70%乙醇各 2min。
3、 水洗 2min。
4、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 30s～3min，多數(shù)情況下 30～60s 即可。
5、 水洗，稍微晾干(不易過(guò)分干燥)。
6、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃溫箱，浸染 45～60min，水洗。
7、 復(fù)染：蘇木素染色液染色 5～8min 或甲基綠染色液染色 2～3min。
8、 水洗、晾干、鏡檢。
染色結(jié)果：
陽(yáng)性顆粒 紫紅色
細(xì)胞核 藍(lán)色(蘇木素)或綠色(甲基綠)

臨床意義：
1、 毛細(xì)胞白血病的毛細(xì)胞 ACP 染色呈強(qiáng)陽(yáng)性或中度陽(yáng)性，且不被酒石酸抑制，其他細(xì)胞均呈陰性或極弱陽(yáng)性。
2、 急性白血病幼單核細(xì)胞 ACP 染色呈陽(yáng)性，原淋巴細(xì)胞呈弱陽(yáng)性，原粒細(xì)胞對(duì) ACP 反應(yīng)不一。
3、 T 淋巴細(xì)胞 ACP 染色呈陽(yáng)性，顆粒粗大、分布密集。B 淋巴細(xì)胞呈陰性或顆粒細(xì)小的弱陽(yáng)性。
4、 戈謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性，尼曼-皮克細(xì)胞呈陰性或弱陽(yáng)性。

注意事項(xiàng)：
1、 TRAP 孵育液易失效，本法宜用皮膚穿刺血涂片，晾干后應(yīng)及時(shí)染色
2、 對(duì)冰凍切片染色時(shí)，應(yīng)減少切片在室溫暴露的時(shí)間。
3、 樣本需新鮮，取材后應(yīng)立即處理，否則會(huì)影響酶的活性。
4、 組織固定需在 4℃冰箱進(jìn)行，時(shí)間不宜超過(guò) 24h，否則酶活性會(huì)減弱或消失。
5、 組織在石蠟包埋時(shí)，溫度不宜高于 56℃。應(yīng)使用熔點(diǎn)為 52～54℃的石蠟進(jìn)行浸蠟，浸蠟時(shí)間要短，否則酶活性會(huì)減弱或消失。
6、 不純的二甲苯會(huì)分解黑色沉淀，宜選用 AR 級(jí)以上的二甲苯。
7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液